유세포 슬롯 사이트 핵심 시설

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유슬롯 사이트 슬롯 사이트법은 셀에 대한 여러 측정에 유용 할 수 있습니다. ~ 안에 가장 단순한 형태의 전방 및 측면 산란은 기본 특성을 나타낼 수 있습니다. 크기와 세분성과 같은, 그러나 슬롯 사이트 유형, 활성화 또는 발현은 어떻습니까? 수준? 분명히, 유슬롯 사이트 슬롯 사이트법은 우리가 최대한 활용하지 않으면 매우 제한적 일 수 있습니다. 형광 분자의 여기 및 방출.

이렇게하려면 셀은 슬롯 사이트 또는 정렬을 위해 준비해야합니다. 항체 또는 형광 프로브. 이것은 일반적으로 몇 단계를 포함합니다 소스 조직 또는 세포 유형에서 관심있는 마커, 마커 위치 또는 세포 및 세포 과정. 항상 당신이 아는 것이 매우 중요하다는 것을 기억하십시오정확히당신이 측정하고자하는 것과 그것을 측정하려는 슬롯 사이트 집단의 인구.

따라서 유세포 슬롯 사이트 코어 시설을 사용하기 전에 정렬하려고하든 슬롯 사이트, 우리는 샘플 제출에 관한 몇 가지 규칙을 알고 있습니다. 우리는 여기에 사용할 시약, 샘플 준비, 차단, 투과 및 염색 및 몇 가지 기본 프로토콜뿐만 아니라 올바른 방향으로 시작되었습니다.

완전히 새로운 시약 세트가 필요슬롯 사이트까?

대담한 새로운 유슬롯 사이트 슬롯 사이트 방향으로 출발하기 전에 만드는 것이 가장 좋습니다. 필요한 모든 시약이 있습니다. 여기에는 해리가 포함됩니다 제제, 투과성/고정 용액, 항체, 생존력 염료, 차단 차단, 염색, 슬롯 사이트 또는 분류를위한 시약 및 버퍼. 처럼 보일 수 있습니다 많은 것이 있지만 대부분의 필수품은 아마도 이미 실험실에있을 것입니다.

셀이 흐름에 대비할 준비가 되었슬롯 사이트까?

수사관 (학생, 기술자 및 기타 사용자)은 샘플을 준비해야합니다. 개별 실험실. 핵심 시설에서는 염색이 이루어지지 않습니다. 필요한 경우 핵심 직원은 다양한 프로토콜에 대한 샘플 준비에 대해 도움을 주거나 조언 할 수 있습니다. 문의 사항이 있으면 핵심에 문의하십시오. 모든 사용자는 샘플 제출 양식을 작성해야합니다 이는 핵심 직원에게 실험을 처리하는 데 필요한 정보를 제공합니다. 형태 여기에서 찾을 수 있습니다. 모든 조사관이 핵심과 상담하는 것이 좋습니다. 실험 설계, 컨트롤 및 충족에 도움이 될 기타 요구와 관련하여 그들의 목표. 이것은 핵심 시설의 사용이 매우 유익 할 수 있도록하기위한 것입니다. 모든 관련자들에게. 이 시설은 슬롯 사이트 분류를위한 잠재적 인 병원성 샘플을 받아 들일 수 있습니다. 인간/영장류 또는 렌티 바이러스 함유/치료와 관련된 질문이있는 경우 샘플, 예약 예약 전에 핵심을 참조하십시오. 라벨이 붙은 샘플 방사성 물질을 사용하면 언제든지 허용되지 않습니다.

유세포 슬롯 사이트의 핵심 단어는입니다.슬롯 사이트. 따라서, 도금 세포 또는 전체 조직은 유세포 슬롯 사이트 수단에 의해 평가 될 수 없다. 그것들은 표면이나 서로 고정되어 있습니다. 따라서 계측을 사용하기 위해 먼저 단일 세포 현탁액으로 세포를 준비해야합니다.

차단해야 할 필요가 있슬롯 사이트까?

차단 여부는 귀하와 선택한 프로토콜에 완전히 달려 있슬롯 사이트다. 하지만, 차단이 필요하다는 것을 알 수있는 상황이 있슬롯 사이트다. 일부 높은 수준의 배경 형광 또는 비특이적 염색을 찾을 수 있슬롯 사이트다. 샘플에서. 두 경우 모두 프로젝트를 모두 긁기 전에 특정 결합을 증가시키고 감소하기 위해 다음 작업 중 하나 또는 둘 다를 찾으십시오. 배경 형광.

Anti-CD16/32 (FC 슬롯 사이트체 블록)

이것은 일반적으로 그렇지 않지만 마우스 또는 쥐 조직의 슬롯 사이트에서 FC 수용체를 목표로합니다. 인간 슬롯 사이트 연구에 사용되거나 필요합니다. FC 수용체, 모노클 로날에 결합함으로써 비 종교적으로 결합 할 가능성이 적어 채점자.

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동물과 인간 모두에서 사용하기위한 저렴하고 종종 더 많은 포괄적 인 방법 슬롯 사이트 연구는 차단제로 표지되지 않은 감마 글로불린 (IgG)을 사용하는 것입니다. 여기 1 차 항체의 숙주 종과 동일한 유형의 감마 글로불린을 사용해야합니다. (따라서 항체가 쥐 IgG2A 항 마우스 인 경우 쥐 감마 글로불린을 사용하십시오). 아이디어는 감마 글로불린은 마우스 조직의 무엇이든 비 종교적으로 결합 할 것입니다. 또는 그렇지 않으면 표적화 항체에 결합 할 수있는 슬롯 사이트 배경 형광 신호 감소.

왜 고정/투과성이 있슬롯 사이트까?

당신은 항상 관심있는 셀을 고치거나 구분 할 필요는 없습니다. 때로는 때때로 공정은 표면 염색에 부정적인 영향을 줄 수 있습니다 (신호 증가 또는 노이즈 증가 또는 감소 신호 강도), 그러나 대부분 사용할 때를 제외하고는 매우 화려한 단계 일뿐입니다. 슬롯 사이트 내 또는 핵내/핵산 염색 (이 염료 중 다수는 종종 불확실합니다. 즉, 살아있는 슬롯 사이트 나 핵막에 침투 할 수 없거나 필요할 때 나중에 슬롯 사이트을 위해 염색 된 슬롯 사이트를 보존합니다 (이것은 또한 신호 강도에 영향을 줄 수 있습니다. 그리고 신호로 소음).

사용중인 항체 및 시약에 따라 고정/구분을 조정해야합니다. 따라서. 대부분의 일반적인 방법에는 70% 에탄올, 절대 메탄올 또는 또는 또는 또는 또는 1% 포르말린/포름 알데히드 (세제 유무에 관계없이). 상업도 있습니다 특정 유형의 슬롯 사이트 내 염색을 위해 특별히 설계된 제품.

밝기와 차별

표면 마커 염색은 1 차 항체를 사용하여 직접 수행 할 수 있습니다. 모노 및 폴리 클론 항체 또는 모노클로 날의 조합을 사용하여 간접적으로 비오틴으로 표지 된 항체. 1 차 항체 염색은 가장 효율적인 경향이 있습니다 가장 명확한 신호를 제공하지만 항상 약하게 표현하는 것은 아닙니다. 슬롯 사이트. 종종 간접 염색을 사용하면 약한 신호를 향상시킬 수 있습니다. 하지만, 이것은 2 차 비특이적 결합으로 인해 배경이 증가 할 위험이 있습니다. 폴리 클로널. 이를 피하기 위해 많은 사람들이 비오틴 접합 된 1 차 항체를 사용하고 그런 다음 스트렙 타비 딘 복합체를 사용하여 염색합니다. 다수의 스트렙 타비 딘은 단일에 결합 할 수있다 비오틴 라벨, 그리고 이것은 그렇지 않은 신호를 늘리는 효과가 있습니다. 비특이적 결합에 대한 걱정.

농도 사이의 염색 과정에서 균형은 항상 찾아야합니다. 사용 된 항체, 인큐베이션 시간 및 온도. 이러한 요소의 최적화 깨끗한 데이터를 얻는 데 중요합니다. 너무 길거나 농도가 너무 크거나 너무 높습니다 온도와 신호는 효과적인 데이터 슬롯 사이트을 위해 너무 밝을 수 있습니다. 비특이적 결합 또는 교차 반응성은 1 차 항체에서도 발생합니다. 너무 짧은 온도에서 너무 짧은 항체를 너무 적게 사용하면 바인딩이 거의 없거나 신호가 없습니다. 대부분의 항체는 제안 된 시작과 함께 제공됩니다 집중력이 있지만 더 중요한 것은 실험실에서 다른 사람의 경험을 신뢰하거나 다른 연구원들이 유사한 계측에 사용한 프로토콜.

대부분의 슬롯 사이트 내 또는 핵 염색은 형광 분자를 사용하거나 형광으로 수행됩니다. 라벨링 된 펩티드 등. 적용에 따라 다양한 제품이 있습니다. 따라서 현재 설정으로 가장 잘 작동하는지 물어보십시오.